Обсуждение возможности передачи вируса лейкемии кошачьих (FeLV) через укус кошачьей блохи (Ctenocephalides felis)

Автор: Лаврова Наталья - ветеринарный врач компании «Байер» (по материалам зарубежной литературы)

ВВЕДЕНИЕ

Лейкемия кошачьих представляет собой широко распространенное вирусное заболевание кошек (FeLV). FeLV был открыт в 1964 г. (Jarret et al., 1964), он является природным ретровирусом. В некоторых странах этот вирус является основной причиной смерти кошек, связанной с инфекционными заболеваниями.

В клинических исследованиях не удалось выявить взаимосвязи между лейкемией человека и FeLV (Sordillo and Markovich, 1982), однако in vitro клетки костного мозга человека могут быть инфицированы этим вирусом (Morgan et al., 1993). Инфицирование FeLV может привести к персистентной инфекции и носительству. (Hoover et al., 1975; Lutz et al., 1980; Hoover and Mullins, 1991). Большинство кошек с персистентной инфекцией погибают в течение 4 лет после инфицирования (McClelland et al., 1980). В этом случае кошки приобретают иммунитет к вирусу после первой вирусемии и считаются иммунными к реинфекции (Charreyere and Pedersen, 1991). Другая же группа кошек становится иммунной после первого воздействия FeLV, клинические признаки инфекции у них отсутствуют (Rojko and Kociba, 1991).

FeLV распространяется горизонтально и вертикально. Вирус передаётся со слюной, кровью, слезной жидкостью, молоком и другими жидкостями организма. Для распространения инфекции требуется непосредственный контакт между кошками (Hardy 1981). Имеются также данные о трансплацентарной передаче (Hoover and Mullins, 1991). Возможен и альтернативный путь передачи инфекции с участием кровососущих паразитов, которые могут переносить вирус при отсутствии непосредственного контакта между кошками.

Известно, что блохи являются переносчиками бактерий, риккетсий и даже ленточных червей (Hinaidy, 1991; Mehlhorn, 2001). Однако о том, способны ли блохи быть переносчиками вирусов, почти ничего не известно. В данном исследовании была изучена потенциальная способность кошачьей блохи C. felis переносить вирус лейкоза кошек.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Блохи были выращены в искусственных условиях, близких к естественным условиям обитания блох на теле собаки. (Фривилл, США). Температуру воздуха внутри искусственной среды поддерживали на уровне 39 С, что приводило к тому, что температура питательной среды (аналога крови собаки) составляла 37 С.

Вирусную РНК выделяли из образцов крови с помощью набора вирусных РНК QiAamp^Ò в соответствии с рекомендациями фирмы-изготовителя (Qiagen, Hilden, Германия). Для получения вирусной РНК блох замораживали в жидком азоте и измельчали в стальной ступке. Измельченный материал смешивали с буферным раствором и выделяли вирусную РНК.

Для выделения вирусной РНК из экскрементов блох, экскременты перемешивали с буферным раствором и продолжали выделение. Для того чтобы не допустить загрязнения ДНК, все препараты затем обрабатывали ДНК-азой I из не содержащего ДНК Набора (Ambion, Остин, США). Обратную транскрипцию вирусной РНК осуществляли с помощью Набора для обратной транскрипции – полимеразной цепной реакции, предназначенного для синтеза 1-нитевой к ДНК (Roche, Индианаполис, США). Амплификацию ДНК выполняли в пробирках вместимостью 100 мкл в объеме 50 мкл, с использованием набора Taq PCR Core Kit (Qiagen, Hilden, Германия).

Схема эксперимента.

Первоначально популяцию блох кормили в течение 24 часов кровью, инфицированной FeLV. Блохи и экскременты были протестированы на наличие вирусной РНК. Затем одну популяцию блох кормили в течение 24 часов (этап 1), а вторую популяцию – в течение 5 часов (этап 2) неинфицированной кровью. После этого были протестированы на наличие вирусной РНК блохи и их экскременты (тест на поглощение вируса) и два полученных в результате образца крови (тест на передачу вируса). Во время третьего кормления блох вновь перенесли на свежую неинфицированную кровь и кормили в течение 24 часов (этап 3) и 5 часов (этап 4), соответственно. Блох, экскременты и полученные в результате образцы крови тестировали на наличие РНК FeLV, аналогично тестированию после 2-го кормления.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Во время первого кормления группу, состоявшую из 110 блох, инфицировали FeLV путём 24-часового кормления 2 мл крови инфицированной кошки. Для подтверждения успешной передачи вируса 10 блох и все экскременты данной группы были протестированы на наличие РНК FeLV.

Вирусная РНК была обнаружена в обоих образцах (блохах и их экскрементах). Произошло выделение с экскрементами FeLV, который попал в организм блохи с питательной средой. Далее оставшиеся 100 инфицированных блох были разделены на 2 группы, и группу 1, состоявшую из 50 блох, кормили в течение 24 часов, а группу 2 – в течение 5 часов 300 миллилитрами неинфицированной крови здоровой кошки. Через определенное время 10 блох и экскременты каждой группы тестировали на FeLV.

Вирусная РНК была обнаружена в блохах из обеих групп и их экскрементах. РНК FeLV можно было обнаружить в течение 5 и 24 часов, соответственно, после проникновения ее в блох и кормления их неинфицированной кровью. Чтобы узнать, произошла ли передача FeLV, была изучена кровь, оставшаяся после 1-го и 2-го кормления. Вирусная РНК была обнаружена в обоих образцах ранее неинфицированной крови, полученной от клинически здоровой кошки. Это доказывает, что кошачья блоха С. felis может выполнять роль переносчика РНК вируса лейкемии кошачьих in vitro.

Вирусную РНК можно было обнаружить в блохах и их экскрементах в период до 24 часов. Кроме того, блохи успешно переносили РНК FeLV непосредственно из инфицированного образца крови в неинфицированный образец.

Во время третьего кормления блох вновь кормили свежей неинфицированной кровью. После 5 и 24 часов, соответственно, блох, экскременты и образцы крови исследовали на наличие FeLV. После этого третьего кормления вирусная РНК не обнаруживалась ни в блохах, ни в экскрементах, ни в образцах крови. РНК FeLV можно было обнаружить в блохах в период до 24 часов после кормления. В течение этого времени вирусная РНК также выделялась с экскрементами блох. Кроме того, блохи могли передавать РНК FeLV непосредственно из одного образца крови в другой, являясь, таким образом, переносчиком вируса. При проведении всех экспериментов в качестве контроля была использована неинфицированная кровь. Ни в одном эксперименте РНК FeLV не обнаружена.

ОБСУЖДЕНИЕ

Известно, что вирус лейкемии кошачьих передается от больной кошки к здоровой со слюной (при облизывании), с кровью (при царапании или драке) и другими жидкостями организма (Hardy et al., 1975). Для распространения вируса в группе животных достаточно близкого контакта между здоровыми и инфицированными кошками (Essex et al., 1977). Результаты нашей работы показывают возможность другого, не связанного с тесным контактом кошек, способа передачи вируса лейкоза кошек посредством кошачьей блохи C. felis. Некоторые виды блох могут жить на разных животных, а также питаться кровью человека. Таким образом, некоторые инфекции могут передаваться между видами, например, от крысы к человеку (чума). Недавно обсуждалась даже возможное участие блох в инфицировании человека рикетсиями (Rickettsia felis) (Richter et al., 2002).

Однако, пока достаточно немногое известно о блохах как переносчиках вирусов. Имеются сообщения о том, что некоторые вирусы могут оставаться активными в организме блохи в течение, по крайней мере, 24 часов (Smetana 1965). Один из выводов данного исследования заключается в подтверждении возможности выделения с экскрементами блох вирусной РНК после 24-часового питания их FeLV – вирусоположительной кровью. Этот факт может приобрести большое значение при рассмотрении различных возможностей инфицирования FeLV. Вполне возможно, что для здоровой кошки существует риск заражения через поврежденную кожу, на которой находятся экскременты блох, после укусов блохами или во время драки с другими кошками. Другим результатом нашего исследования является обнаружение возможности прямой передачи FeLV блохами во время укусов. Вирус лейкемии кошек может проникнуть в пищеварительный тракт блох и выделиться с экскрементами; возможна также прямая передача вируса, когда блоха питается кровью кошки.

Остается неясным, имеет ли такой путь инфицирования клиническое значение in vivo, и для ответа на этот вопрос необходимы дальнейшие исследования. В силу того, что давно известна опасность передачи различных заболеваний при укусах блох человеку и домашним животным, следует говорить о важности профилактических мер против заражения домашних животных блохами.

Регулярное применение эффективных местных точечных инсектицидов позволяет устранить заражение блохами и предотвратить передачу заболеваний. Для этого можно, например, использовать препарат фирмы Байер «Адвантейдж». Действующим веществом препарата «Адвантейдж» является имидаклоприд, обладающий лечебными и профилактическими свойствами. Препарат можно использовать для устранения заражения блохами, а также для предотвращения попадания новых блох на животное. Он прост в применении и не обладает побочными действиями, поэтому его можно использовать для ослабленных и молодых животных, а также для беременных и кормящих самок.

Обсудить на Форуме